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熒光定量PCR技術服務-定量

簡要描述:實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應用。 實時熒光定量PCR:在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-05-13
  • 訪  問  量:4680

定量(Absolute Quantification,AQ)

分析用于確定未知樣本中某個核酸序列的量值,即通常所說的拷貝數,應用與病原體檢測,轉基因食品檢測,及基因表達研究。

SYBR Green特性:

(1)只有和雙鏈DNA結合后才發(fā)熒光。

(2)變性時,DNA雙鏈分開,無熒光。

(3)在延伸結束階段采集熒光信號。

(4)SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結合發(fā)光,所以必須在反應結束時做熔解曲線分析。 

TaqMan探針的特性:

(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等 

(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)

(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針。

定量的標準樣品

(1)含有和待測樣品相同擴增片段的克隆質粒

(2)含有和待測樣品相同擴增片段的cDNA

(3)PCR的產物,可分別做系列稀釋。

服務流程:

步驟

客 戶 提 供

服 務 內 容

基 屹 提 供

1

新鮮的且盡量多的材料;已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

DNA/RNA提取,根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。

 

2

純化好的DNA/RNA(大于5 ug/樣品);已知的全長基因序列;盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。

 

3

 

以DNA為模板,對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析

提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細的實驗步驟。

注意:客戶可根據所能提供的起始材料不同,選擇從步驟1或2啟動項目。

 

 

 

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